dtt是干什么的

dtt是干什么的

DTT(二硫苏糖醇)是实验室常用的还原剂,广泛应用于蛋白质保存和蛋白二硫键的还原。由于其极易被氧化且稳定性较差,通常需将DTT保存于-20°C以保持其稳定,有效期可长达数年。作为强还原剂,DTT的还原性主要源于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。在pH为7的条件下,其氧化还原电势为-0.33伏。DTT的保存特点与其类似物DDT有关,DTT作为一种常用的还原剂,具有抗氧化作用,且进口分装。与巯基乙醇相比,DTT作用相似,但其刺激性气味较小,毒性也较低。在较低浓度下,DTT的效果与巯基乙醇相近,但价格略高。DTT粉末的一般保存条件是在-20°C下保存,而1M DTT溶液在-20°C下可保存2年以上。由于DTT易受空气氧化,其稳定性较差。然而,通过冷冻保存或在惰性气体中处理可以有效延长其使用寿命。此外,随着pH值的降低,DTT的有效还原性也会降低。在低pH值条件下,Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP盐酸盐)可作为DTT的替代品,且比DTT更为稳定。在应用方面,DTT常作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。通过在DNA溶液中加入DTT并反应一段时间后去除,可以有效降低DNA的二聚化,从而提高某些偶联反应实验的效率。DTT也用于蛋白质中二硫键的还原,但往往无法还原包埋于蛋白质结构内部的二硫键。这类二硫键的还原通常需要先通过变性(如高温加热或加入变性剂)来破坏蛋白质的结构。在蛋白质纯化和保存过程中,DTT可防止蛋白质中的半胱氨酸残基被氧化而失活。然而,需要精确控制DTT的添加量,以保持-SH的还原状态而不还原二硫键。有建议使用摩尔数计算,加入5-10倍的DTT以保护-SH。同时,若蛋白质在保存缓冲液中含15%左右的甘油,可有效稳定蛋白质。需要注意的是,DTT在离子状态下才具有作用,在pH 7-9.5时作用最强,而pH降至3以下时几乎不电离。因此,可以通过降低pH至3以下来终止DTT的作用。此外,DTT的作用还受到pH的影响。在尿素变性过程中,若蛋白质存在分子间或分子内的二硫键,即使使用高浓度的尿素或盐酸胍,如果没有DTT等还原剂,蛋白质也可能无法完全变性(断裂二硫键)。